HR0243 组织胞核/胞浆分离试剂盒
产品简介
组织胞核/胞浆分离试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持,本品用于科学研究,本品质量稳定,价位合理,需要组织胞核/胞浆分离试剂盒等亚细胞结构研究产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括组织胞核/胞浆分离试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:组织胞核/胞浆分离试剂盒
英文名称:Cell nuclear / cytoplasmic separation Kit
产品货号:HR0243
产品规格:50T|100T
组织样本细胞核/胞浆分离试剂盒可以从各种动物实体组织如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等组织样本中分离细胞核和胞浆组分。此试剂盒提供了一个系统,维持核和胞浆组分是分开和完整的。优化的试剂配方和程序可以快速分离胞核和胞浆,而几乎没有交叉污染。
本试剂盒提取的胞核和胞浆组分仍保持其生化功能,适合下游分析如转录活性,RNA拼接,gel-shift分析,报告分析,酶活性分析和WB等。
储存条件:试剂A和B 2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
1.取50mg-100mg组织样本用剪刀尽可能剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆①至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨)。
2.用冷 PBS 洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3.在约 30μl沉淀中加入300μl冷的提取液A,涡旋振荡混匀或吹打混匀,置冰上振荡30分钟。(没有振荡条件的话,也可冰上静置,中间每隔5分钟涡旋振荡或吹打混匀。)
4.在 4℃,1200×g条件下离心5分钟。
5.将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到胞浆组分,请置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
6.沉淀用 PBS 洗涤一次,然后在4℃,2000×g条件下离心5分钟,弃上清。
7.沉淀为细胞核组分,将沉淀用 200μl保存液B重悬后保存备用或直接用于下游实验。
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名称:Percoll
货号:BTN131134
规格:250mL
Percoll是一种常用的低粘度的密度梯度介质,由直径在15-30nm的硅胶颗粒组成,颗粒外包被了聚乙烯吡咯烷酮(PVP),为化学惰性,不会影响细胞的活性。
产品特点:
1.Percoll渗透压很低(<20mosm/kg H2O),粘度也很小,可形成高达1.3g/ml 密度。
2.采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。
3.离心后能形成1-1.3g/mL的密度梯度,可用于分离各种悬浮的细胞、线粒体、叶绿体和病毒(可小到70S)。
4.由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。此外,Percoll不穿透生物膜,对细胞害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。
5.Percoll溶液高压灭菌,必须进行不添加盐或蔗糖。盐的存在会引起percoll糊化,蔗糖的存在会引起焦糖化。
储存条件:常温运输和保存,有效期五年(未开封状态)。
使用方法:
1.不同浓度(密度)Percoll溶液的制备:先用9 份Percoll与1份 8.5% NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85% NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度。
Percoll浓度(%) | 70 | 60 | 50 | 40 | 30 | 20 |
比重g/ml | 1.090 | 1.077 | 1.067 | 1.056 | 1.043 | 1.031 |
2.不连续密度梯度Percoll层的制备:先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的Percoll液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层Percoll 比重相差不大时,可将Percoll液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
3.装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
4.离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层Percoll 之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
5.取样:当所要分离的细胞大部分在两层的界面时,可逐层去除Percoll液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于Percoll 层中,则需要逐层收集。收获含有Percoll液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
分离纯化细胞举例
1.富含NK活性大颗粒淋巴细胞(LGL)的纯化:按顺序由下向上逐层加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五种不同密度的Percoll,如用10ml 试管(或塑料管)分离,每层Percoll约1.2~1.5ml,初步从外周血中分离的PBMC细胞1×108悬于1ml培基中,按要求装样、离心和取样。一般富含NK 杀伤活性的LGL细胞位于42.5%与45%Percoll界面以及上下二层的Percoll液中。
2.纯化淋巴母细胞和除去死细胞:分别叠加50%和30%Percoll液。收取经PHA(或其它抗原、有丝分裂原)刺激PBMC,或含有较高比例异型的PBMC(如肾综合征出血热患者),按要求装样、离心和取样。位于管底的淋巴细胞为小淋巴细胞;两层Percoll之间为淋巴母细胞,纯度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死细胞。收获淋巴母细胞可进行表型、结构以及功能的研究。
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