HR0275 细菌裂解液(免超声)

本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。...

细菌裂解液(免超声)

 

产品编号：HR0275

产品组成：

细菌裂解液(免超声)储存条件：

裂解液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制剂未开盖前也可以2-8℃保存，开盖使用后-20℃储存。

● 蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。

产品简介：

细菌裂解液采用优质原料配制，用于细菌菌体的裂解，用于细菌蛋白提取，裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western等下游实验。

本裂解液提取的蛋白可用于WB、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本裂解液中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我司其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（货号HR0389）。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：

● 螺旋盖微量管装试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 如果试剂盒不能短时间用完，蛋白酶抑制剂混合物不可一次全部加入提取液。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：

1、裂解液的准备：

根据所需提取的样本量，每500μL裂解液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

2、在4℃,10000g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。

3、用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。

4、按每50-100mg湿重菌体样本加入500μL裂解液，吹打混匀，置摇床室温振荡30-45分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 如果没有低温振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。

5、在4℃ 10000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入干净离心管。

6、即得到细菌蛋白样品。

7、将细菌总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA方法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

细菌裂解液(免超声)常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

膜蛋白丰度比较低，处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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