HR0285 变性蛋白裂解液
变性蛋白裂解液采用优质原料配制,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典常用的细胞组织快速裂解液。变性蛋白裂解液含有SDS,裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP 等下游实验,不可用于co-IP。...
变性蛋白裂解液
产品编号:HR0285
产品组成:
组份 |
50mL |
100mL |
组份A:变性蛋白裂解液A |
50mL |
100mL |
组份B:蛋白酶抑制剂混合物B |
200μL |
500μL |
说明书 |
1份 |
1份 |
变性蛋白裂解液储存条件:
蛋白提取液2-8℃保存,蛋白酶抑制剂-20℃保存。有效期1年。
【注】:
● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存,开盖使用后-20℃储存。
产品简介:
变性蛋白裂解液采用优质原料配制,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,是经典常用的细胞组织快速裂解液。变性蛋白裂解液含有SDS,裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP 等下游实验,不可用于co-IP。
变性蛋白裂解液中已含常用磷酸酶抑制剂。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器
● PBS缓冲液(pH7.4)
变性蛋白裂解液用方法:
细胞裂解:
1、裂解液制备:每1mL冷的裂解液中加入4μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
【注】:
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2、取5-10×106个细胞,在4℃,1000×g条件离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3、用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4、每5×106个细胞中加入500μL冷的裂解液(每106个细胞,大约10mg或10μL压积,加100μL裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL~150μL,或一个75cm2培养瓶加1mL。裂解液和细胞应充分接触。如果裂解液不足量,细胞裂解效率将会降低),混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
【注】:
● 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
5、在4℃,12000×g条件下离心15分钟。
6、将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
组织裂解:
1、裂解液制备:每1mL冷的裂解液加入4μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2、取100mg组织样本剪碎,加入1mL裂解液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3、将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中,在4℃条件下振荡15-20分钟。
4、在4℃,12000×g条件下离心5分钟。
5、将上清吸入另一预冷的干净离心管,用于下游实验。
6、上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析:
● 蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
● 用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
● 提取时出现胶状沉淀?
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。
● 提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒含有离子型去垢剂组份,破坏蛋白的结构,对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白不再保持其天然构象和活性。
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