HR0506 细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue

AlamarBlue的无毒特性使细菌可长期暴露于这种染料,因此可随时间进行测量或进行终点测量。由于AlamarBlue对细菌无毒、无害,不影响细菌的合成与分泌等活性,因此可以对同一批细菌的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察,因此有操作简便和几乎不干扰细菌正常代谢的特点。...

细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue

 

产品编号：HR0506

产品组成：

储存条件：

2-8℃避光保存。有效期1年。

【注】：

● Alamar Blue存放于2-8℃,长期不用请分装后-20℃避光保存。

● 避免反复冻融。多次冻融会导致失效。

● 冻存后溶解时注意重新混匀。

● 试剂拆封会请尽快使用完！

细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue产品简介：

本试剂盒是应用新型的氧化还原指示剂阿尔玛蓝快速高灵敏度检测细菌活性的比色检测产品。

AlamarBlue是一种氧化还原指示剂,能根据代谢活性产生吸光度变化和荧光信号。其在氧化状态下呈现紫蓝色无荧光性,而在还原状态下,转变为呈粉红或红色荧光的还原产物,其吸收峰为530-560nm,而散射峰为590nm。在细菌增殖过程中,体内NADPH/NADP、FADH/FAD、 FMNH/FMN 和NADH/NAD 的比值升高,处于还原环境。摄入菌体内的染料被这些代谢中间体还原后释放到体外并溶于培养基中,使培养基从无荧光的靛青蓝变成有荧光的粉红色。最后用普通分光光度计或荧光光度计进行检测,吸光度和荧光强度与活性细菌数成正比。这种染料经过验证安全无毒,用于细菌活性和细菌增殖的定量分析。

AlamarBlue的无毒特性使细菌可长期暴露于这种染料,因此可随时间进行测量或进行终点测量。由于AlamarBlue对细菌无毒、无害,不影响细菌的合成与分泌等活性,因此可以对同一批细菌的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察,因此有操作简便和几乎不干扰细菌正常代谢的特点。

检测方法：

● 在530-560nm激发,在590nm发射荧光

● 在570nm和600nm用分光光度计测定光吸收

产品特点：

● 使用方便：仅使用单一试剂；

● 对微生物细胞进行灵敏、无毒且安全的细胞活力和增殖测定；

● 能长期使用,持续进行测定而不损伤细菌或产生有毒废物；

● 灵活、简便- 能与多种仪器平台、96和384孔板以及荧光或分光光度法测定兼容；

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 酶标仪或分光光度计 ● 离心机 ● 移液器 ● 纯水 ● PBS/HBSS(无酚红) ● 96孔培养板

使用注意事项：

● 合适密度的细菌可以增加检测灵敏度。

● 注意接种细菌浓度和加入检测试剂后孵育时间。细菌浓度过高或孵育时间过长,会导致继发性还原反应,产生无色和荧光消失。

● 孵育时,需避光。

● 本产品可以使用荧光或分光光度检测,但荧光的灵敏度高,实验误差小,推荐使用荧光检测。

● 需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

● 正式实验前,建议先做预实验摸索接种细菌的数量和加入Alamar Blue试剂后的培养时间。

细菌活性检测试剂盒-AlamarBlue使用方法：

细菌的活性实验,一般可在96孔细胞培养板中进行,下面以96孔板检测为例,如果使用其他培养方法,AlamarBlue试剂加入培养液用量的10%即可。

1、每孔加入100μL细胞悬液。细胞的数量取决于实验目的和培养时间。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素确定。

2、接种的细胞按照实验需要,送入培养箱进行培养。

3、培养结束后,取出AlamarBlue试剂,置室温融化混匀,于洁净工作台内按10μl/孔加入微孔板中,在培养箱内继续孵育12-24小时,培养液颜色由蓝变为粉红（如采用荧光分光光度法,只需孵育2-8小时）；

【注】：

● 检测灵敏度随着温育时间的延长而增加，细胞数量少的样品应延长孵育时间至24h。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。温育时间要摸索。

4、在570nm测定吸光度,参考波长600nm。如无此滤光片,可用565nm和 610nm的滤光片替代。

【注】：

● 数据处理时用A570减去A600.

5、也可用荧光分光光度法检测,激发光波长560nm（在530-560nm之间均可）,发射光波长为590nm。

【注】：

● 荧光检测更为灵敏，无法检测荧光时测定吸光度。

● 测定板或试管可用铝箔纸包裹，并保存在4℃，然后在1-3天之内检测而不会影响荧光或吸光度值。

● （可选）可以直接添加反应终止液到100μL的细胞中可终止细胞活力试剂反应。

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