HR7813-500T 内质网染色试剂盒(绿色荧光)

细胞内质网染色试剂盒是利用E02荧光进行内质网特异性荧光染色的试剂盒。该探针具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的内质网荧光探针，该探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。...

内质网染色试剂盒(绿色荧光)

 

产品编号：HR7813

产品组成：

储存条件：

染料-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期6个月。

【注】：

● 染料短期2-8℃保存，长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

● 探针为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

内质网染色试剂盒(绿色荧光)产品简介：

细胞内质网染色试剂盒是利用E02荧光进行内质网特异性荧光染色的试剂盒。

该探针具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的内质网荧光探针，该探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。

该探针高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲类受体，该受体富集存在于内质网上，因此该探针适合用作内质网荧光探针，E02最大激发波长为483nm，最大发射波长为500nm。

检测方法：

● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦 ● 流式细胞仪

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机 ● PBS ● 或者HBSS（无酚红）

注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● E02染色探针液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

● 染色后立即进行分析。

● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

内质网染色试剂盒(绿色荧光)使用方法：

1、染色工作液配制：

根据样本数量，用37℃培养箱预热HBSS或PBS或其他缓冲液将E02荧光染料500-1000倍稀释。配制成染色工作液。

【注】：

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 以下实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化染色浓度和时间。

2、细胞染色

悬浮细胞染色

1) 用HBSS洗涤细胞2次。

【注】：

● 500×g离心5分钟。

2) 加入适量体积的预热的染色工作液重悬细胞。

3) 在37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用10分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 孵育结束，500×g离心2分钟。

5) 移除上清液，加入37℃预热的培养基重悬细胞。

6) 在激光共聚焦显微镜观察细胞。

贴壁细胞染色

1) 用HBSS洗涤细胞2次。

2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的预热染色工作液。

【注】：

● 96孔细胞培养板每孔加入200μL染色液。

3) 37℃孵育细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用10分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 吸干染色工作液，加入新鲜培养基。

5) 在激光共聚焦显微镜观察细胞。

3、用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜检测。

激发波长为488nm，最大发射波长为500nm。

常见问题分析：

● 可以对细胞进行固定吗？

已染色细胞用固定后，仅部分荧光探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

● 固定细胞的方法？

用4%甲醛于37℃固定细胞2min。细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2 次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

● 可以对细胞进行透化处理吗？

不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100或其它透化剂透化后，细胞内将无荧光信号保留。

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