HR0083-50T 血浆蛋白提取试剂盒

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳。如下游实验需要直接用于双向电泳、等电聚焦,请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳。...

产品特点：

1、使用方便,将蛋白提取的时间缩短至30分钟。

2、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。

3、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。

4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6 种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。

● 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。

● 如果不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 本试剂盒提取的是血浆总蛋白,含有高丰度的白蛋白。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5μg/μL。

● 电泳加loading buffer后水煮时,蛋白液有时会变得非常粘稠,可以用65℃保存10分钟代替沸水煮。

● 对于某些目的蛋白在血浆中含量很低的情况,或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况,需要先去除白蛋白。

使用方法：

1、提取液制备：

每200μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2、取抗凝全血样品,在4℃,1500×g条件下离心10分钟,弃细胞沉淀,留上清。

【注】：

● 使用含抗凝剂的血液标本收集管,而且采血后必须立即轻轻颠倒采血管混合5-10次,以确保抗凝剂发挥作用。

● 冷冻保存后的抗凝收集的血浆,解冻时可能会出现絮状浑浊,如果有则需要离心去掉浑浊后再进行下游提取。

● 吸出血浆时用吸头贴着液面逐渐往下吸,注意避免吸起沉淀成分。

3、取上清血浆,每100μL血浆样本中加入100-200μL蛋白提取液,充分混匀后,在4℃条件下静置5分钟。

4、在4℃,14000×g条件下离心10分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到血浆蛋白。

6、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白浓度一般在20-30mg/mL。

● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。

7、根据相关实验要求用蛋白稀释液B稀释血浆蛋白样品至所需浓度。

常见问题分析：

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。

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