HR9087-50T 内质网提取试剂盒(低速离心法)

内质网提取试剂盒(低速离心法)只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。本试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的内质网蛋白的提取。...

使用方法：

细胞内质网提取：

1、取1～2×10⁷个细胞，在4℃，500×条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；

2、用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3、加入500μL冷的试剂A，置冰上10分钟。

4、用Dounce匀浆器匀浆充分匀浆，然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。

【注】：

● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-20次，再用紧型槌匀浆20-30次。

● 每上下一个来回为一次。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。

6、将上清在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。

7、将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。

8、将上清在4℃，12000-16000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL试剂B，充分混匀。

【注】：

● 试剂B 使用前请充分混匀。

10、置2-8℃冰箱静置过夜。

【注】：

● 静置保存时间不少于10小时。

11、在4℃条件下，10000×g离心20-45分钟。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干上清。

● 吸取时小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即为内质网。

组织内质网提取：

1、取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。

2、用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。

3、加入500μL冷的试剂A，置冰上10分钟。

4、用Dounce匀浆器充分匀浆30-40下，至无明显固体团块。然后4℃,1000×g力条件下离心5分钟。

【注】：

● 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-20次，再用紧型槌匀浆20-30次。

● 每上下一个来回为一次。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。

6、在4℃，11000×g力条件下离心10分钟。

7、将上清吸入另一预冷的干净离心管。弃沉淀。

8、将上清在4℃，12000-16000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，留上清。

9、在上清中加入125μL试剂B，充分混匀。

【注】：

● 试剂B使用前请充分混匀。

10、置2-8℃冰箱静置过夜。

【注】：

● 静置保存时间不少于10小时。

11、在4℃条件下，10000×g离心20-45分钟。

12、小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干上清。

● 吸取时小心，防止吸掉沉淀。

13、沉淀即为内质网。

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