HR0453-100T DAPI染色试剂盒

DAPI(diamidino-2-phenylindole) 能与双链DNA小槽，特别是AT碱基结合，也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA 结合时，荧光强度增强20倍，而与单链DNA 结合则无荧光增强现象，因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA 的方法。DAPI的荧光强度较Hoechst低，但荧光稳定性优于Hoechst；其特异性较溴化乙啶和碘化...

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS/HBSS（无酚红）

注意事项：

● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 染色后立即进行分析。

● 染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

● 本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

● 据样本情况和下游检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。

● 活细胞原位染色不同细胞需要的时间差异较大，可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-4小时，或更长时间。

● 以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色。以下方法仅供参考，也可以参阅相关资料使用其他方法。

 

 

使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样品数用PBS将DAPI染色液10-100倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 也可使用培养基或其他缓冲液稀释。

● 原位染色时，也可以不稀释，直接按合适的终浓度加入培养基混匀。

● 工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超时10倍范围的浓度下进行测试。50倍稀释适合大多数细胞样本。

● 检测贴壁细胞时，胰酶消化前，去掉的上清也要保留，因为可能存在一些掉下来的凋亡细胞，在胰酶消化后，再将这些上清加回去，一起检测，结果更加准确。

● 离心转速根据平时该细胞实验时的转速即可。

2、细胞爬片/涂片的制备：

贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。

【注】：

● 也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。

对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000×g离心5分钟收集细胞，用PBS洗2次，收集调整细胞数为1×10⁵/mL，涂片或用离心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；

3、用PBS洗涤涂片两次。

4、加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色5-30分钟。

【注】：

● 活细胞原位染色时，不同细胞需要的时间差异较大，一般大部分细胞10-30分钟即可。有些细胞可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-2小时。

5、吸除染色液。

6、用1×洗涤液洗涤涂片。

【注】：

● 用纯水10倍稀释试剂B，充分混匀，即为1×洗涤液。

7、用荧光显微镜检测结果。

染料-DNA复合物的最大激发波长为360nm，最大发射波长为454nm。

结果分析：

置于荧光显微镜下用360nm激发光观察结果：DAPI染色呈蓝白色荧光。

早期凋亡细胞呈现核浓缩，染色加深，或核染色质呈新月形聚集于核膜一边；晚期凋亡细胞表现为核碎裂成大小不等的圆形小体，并被细胞膜所包绕，即凋亡小体。

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