HR8172-100mL 红细胞裂解液
红细胞裂解液是一种用于从人或鼠等的血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。本裂解液经过优化配方,在裂解红细胞的同时几乎不损伤淋巴细胞(lymphocyte)或其它有细胞核的细胞。本裂解液的主要有效成分为氯化铵。...
使用方法:
组织细胞样品:
1、新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液,离心弃上清。
2、加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1mL,则加入3-5mL的红细胞裂解液。本步骤在室温或4 度操作均可。
3、400-500×g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500×g离心 2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
血液样品:
1、取新鲜抗凝血,400-500×g离心5分钟,离心弃上清。
2、加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1mL,则加入6-10mL的红细胞裂解液。本步骤在室温或4 度操作均可。
【注】:
● 对于鼠的血液,裂解1-2分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。
3、400-500×g离心5分钟,弃红色上清。4℃离心效果更佳。
4、如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5、洗涤1-2次:加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀,400-500×g离心2-3分钟,弃上清。可再重复1次,共洗涤1-2次。洗涤液用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。
6、根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。
对于微量或少量的血液样品,可以在第一步中不进行离心弃上清的操作,直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液,并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液,裂解4-5分钟已经足够,对于人的外周血,宜延长裂解时间至10分钟,但通常不宜超过15分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。
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