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如何使用生物素标记抗体或蛋白？
发布时间：2022-05-23浏览次数：927返回列表
生物素，是一个分子量只有244.31Da的小分子，经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合，不仅可以很好地保持大分子的生物活性，而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用，使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。
那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢？下面古朵给大家分享一下。
1.10ul，50ul，200ul，1000ul可调移液器
2. 恒温箱（37℃）
3. 离心机（离心力可达到12,000×g）
4. 生物素标记试剂盒（Cata.No:EBLK0002, Elabscience)
实验前准备
1.仔细阅读使用说明书。
2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。
3.提前20min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温（注：不需要用到的NH2-Reactive Biotin继续放置冰箱中）。
4.溶解NH2-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，静置10min，待其充分溶解，此时生物素的浓度为10mM。
操作步骤：（本操作步骤按照1mg的量进行标记）
1.取1mg待标记抗体于Filtration tube中，并加入相应体积的Labeling Buffer，使抗体的终浓度为2mg/ml，12,000 x g离心10min。（注：①Filtration tube的大体积为0.5ml②待标记抗体浓度低时，可先超滤离心一次）
2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。12,000 x g离心10min。
3. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使终体积为0.5ml，并轻轻吹打混匀，12,000 x g离心10min。
4. 操作3重复一次。
5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6,000 x g离心10min。
6. 收集离心管中的溶液，即为生物素标记的抗体。
