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反相色谱柱ODS柱使用注意事项

发布时间:2017-07-20浏览次数:3236返回列表

ODS柱是一种常用的反相色谱柱,也叫C18柱;由于它是长链烷基键合相,有较高的碳含量和更好的疏水性,对各种类型的生物大分子有更强的适应能力,因此在生物化学分析工作中应用的为广泛。反相色谱柱ODS柱使用注意事项如下:
1、使用预柱保护分析柱(硅胶在性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度);
2、将样品溶解在流动相或性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或性相近的溶剂中。样品溶液不应含有任何颗粒物,使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以250x4.6mm规格为例,小于10μL);
3、在进行分析之前,请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡;
4、所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃;
5、流动相使用前必须经脱气和过滤处理;
6、反相色谱柱ODS柱,保存溶剂通常是含至少30% 有机相的水溶液,也可在常规清洗后直接保存在有机相中;
如果需要长时间储藏,则需要使用较高比例的有机相(有机相比例至少大于50%);
7、大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围;
8、避免流动相组成及性的剧烈变化;
9、所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相pH值没有变化,并确保流动相没有长菌。 流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱尽量在pH2~8范围内使用。请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,可能会造成保留时间的不稳定或者色谱柱键合相的损害;
10、如果使用性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中;
11、氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
12、在条件允许情况下,使用前按照说明书方法进行柱效测试。以确保色谱柱的正常。
13、在储存反相色谱柱ODS柱之前,请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱(去除缓冲盐),再用更强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,反相色谱通常使用甲醇或乙腈),然后使用合适的溶剂储存色谱柱。